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细胞冻存的正确方法你用对了吗
发布时间:2021-10-09   点击次数:538次

大家在做细胞实验的时候经常会有冻存的的情况,但细胞冻存的正确方法你用对了吗?

首先冷冻保存方法:

1、传统方法:冷存管置于4C10分钟-->-20C30分钟-->-80C 16~ 18小时(或隔夜)-->液氮槽vaporphase长期储存。

-20C不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

2、程序降温:利用已设定程序的敌绿丫┳⒉崴38-澳门新浦京8455com俳滴禄-1~-3C/分钟之速度由室温降至(-80C以下) -120C,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

3、HAKATA无血清细胞冻存: 加入HAKATA无血清细胞冻存液制成悬液,直接冻于-80°C,可保存≥5年。

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其次操作步骤:

1、冷冻前24-48小时更换半里或全里培养基,使细胞处于指数生长期。

2、配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚矾(DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。

3、离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少里细胞悬浮液(约0.1m1)计数细胞浓度及冻前存活率。

4、取与细胞悬液等里的冻存液,缓慢逐商加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液( DMSO醉后浓度为5~ 10%),使细胞浓度为1~5x 10*cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~ 2nl/mal,并取.少里细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。

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